近年來，細(xì)胞增殖一直是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過 DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程，其中核DNA的復(fù)制倍增是整個(gè)過程的重要特征。細(xì)胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、腫瘤生物學(xué)、藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域，不僅在研究細(xì)胞的基本生物學(xué)特征中非常重要，而且是分析細(xì)胞狀態(tài)、研究遺傳性狀的一種基本方法，可為探討疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷疾病及治療疾病提供有價(jià)值的資料。檢測細(xì)胞增殖的方法目前主要分為代謝活性檢測、DNA合成檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測等。此外，還可以檢測ATP等酶活性、鈣離子內(nèi)流、細(xì)胞膜完整性等，每種檢測方法都存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，盡量選擇準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好的檢測方法或?qū)⒍喾N檢測方法結(jié)合，從而客觀、全面地反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果。小愛主要介紹代謝活性檢測和DNA合成檢測兩種常用的細(xì)胞增殖檢測方法。
一、代謝活性檢測
CCK-8試劑盒
產(chǎn)品簡介：Cell Counting Kit 8簡稱CCK-8試劑盒，是用于測定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。
檢測原理：CCK-8基于水溶性四唑鹽WST-8。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜(Formazan)染料。甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，與活細(xì)胞數(shù)量成正比。通過比色，可以動(dòng)態(tài)地量化活細(xì)胞的數(shù)量，從而對細(xì)胞增殖或藥物毒性進(jìn)行檢測本試劑盒通常用于貼壁或懸浮細(xì)胞的周期與凋亡檢測。如果用于組織，則需要把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，再進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品優(yōu)勢：CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，檢測快速，毒性非常低，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。
CFSE {5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
產(chǎn)品簡介：CFSE是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料，具有與細(xì)胞特異性結(jié)合的琥珀酰亞胺脂基團(tuán)和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團(tuán)，使其成為一種良好的細(xì)胞標(biāo)記物。
檢測原理：CFSE本身沒有顏色和熒光，直至細(xì)胞內(nèi)的酯酶去除其醋酸鹽基團(tuán)，產(chǎn)生能發(fā)出明亮熒光的羧基熒光素琥珀酰亞胺酯。琥珀酰亞胺酯與細(xì)胞內(nèi)氨基反應(yīng)，形成穩(wěn)定且能用醛固定劑固定的熒光偶聯(lián)物，被CFSE 標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光。
產(chǎn)品優(yōu)勢：應(yīng)用廣泛，除了流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
產(chǎn)品簡介：MTT 法又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。
檢測原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，吸光度越大，表示細(xì)胞活性越強(qiáng)，說明藥物毒性越小。
產(chǎn)品優(yōu)勢： 靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。
Alamar Blue 阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑 abs47047610
產(chǎn)品簡介： 阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種細(xì)胞活力檢測試劑，包含一種具細(xì)胞膜滲透性、無毒性且弱藍(lán)色熒光的指示劑刃天青（resazurin）。
檢測原理：刃天青是一種氧化還原指示劑，根據(jù)細(xì)胞代謝還原情況發(fā)生顏色變化。氧化態(tài)的刃天青呈紫藍(lán)色且基本無熒光，其還原態(tài)產(chǎn)物試鹵靈（resorufin）轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色且高度熒光，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與呼吸活細(xì)胞數(shù)量呈正比。阿爾瑪藍(lán)的顏色變化可通過普通分光光度計(jì)檢測吸光度變化，檢測波長為570nm，參考波長為600nm；阿爾瑪藍(lán)的熒光變化可通過熒光光度計(jì)檢測，激發(fā)波長在530~560nm之間，發(fā)射波長為590nm。
產(chǎn)品優(yōu)勢： 阿爾瑪藍(lán)為單一試劑，可連續(xù)快速的檢測細(xì)胞的增殖情況。阿爾瑪藍(lán)對細(xì)胞無毒無害，不會(huì)干擾電子傳遞鏈，不會(huì)干擾細(xì)胞呼吸或功能，也不會(huì)影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性。適用于對同一批細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行連續(xù)觀察和更進(jìn)一步的觀察，操作簡便且?guī)缀醪桓蓴_細(xì)胞正常代謝。
二、DNA 合成檢測
Brdu（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）
產(chǎn)品簡介：BrdU( bromodeoxy uridine) 是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其胸腺嘧啶環(huán)與5位C連接的甲基被溴取代。
檢測原理：BrdU 可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細(xì)胞。
產(chǎn)品優(yōu)勢：目前常用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物有4種，Brdu、DNA polymerase α、PCNA 、Ki-67等。因組織細(xì)胞內(nèi)無內(nèi)源性Brdu存在，特異性強(qiáng)，所以Brdu應(yīng)用較廣。
